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小鼠TET ELISA试剂盒
小鼠TET ELISA试剂盒
品名:
小鼠TET ELISA试剂盒
货号:
F5667-A
产品品牌:
丹施生物
价格:
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实验原理:

本试剂盒应用夹心免疫法测定标本中小鼠TET含量,用捕获抗体包被微孔板,制成固相抗体,往包被的微孔板中依次加入样品, 再与HRP标记的检测抗体结合,形成抗体-抗原-酶标检测抗体复合物,经过彻底洗涤后加底物TMB显色,TMBHRP 酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色,颜色的深浅和样品中小鼠TET的含量呈正相关,用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度(OD ) ,通过标准曲线计算样品中小鼠TET的含量。

检测范围:  1.25 ng/mL - 40 ng/mL

灵敏度:   最低检测浓度小于 0.035 ng/mL

保存条件及有效期: 试剂盒保存: 2-8℃, 有效期: 6 个月

试剂盒组成: (本试剂盒仅用于科研不能用于临床诊断)

试剂盒组成

48 孔配置

96 孔配置

保存

酶标包被板

1×48

1×96

2-8

标准品

0.5ml×1

1ml×1

2-8

标准品稀释液

5ml×1

10ml×1

2-8

检测抗体(HRP

5 ml×1

10 ml×1

2-8

样品稀释液

3 ml×1

6 ml×1

2-8

显色剂A

3 ml×1

6 ml×1

2-8

显色剂B

3 ml×1

6 ml×1

2-8

终止液

3 ml×1

6 ml×1

2-8

20×浓缩洗涤液

15ml×1

25ml×1

2-8

封板膜

2

2

密封袋

1

1

说明书

1

1

样本处理及要求:

1.   血清:室温血液自然凝固10-20分钟,离心20分钟左右(2000-3000 /)。仔细收集上清,保存过程中如出现沉淀,应再次离心。

2.   血浆:应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000 /)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应该再次离心。

3.   尿液:用无菌管收集,离心 20 分钟左右(2000-3000 /)。仔细收集上清,保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4.   细胞培养上清:检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心 20 分钟左右(2000-3000 /)。仔细收集上清。检测细胞内的成份时,用 PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,

5.   组织标本:切割标本后,称取重量。加入一定量的 PBSPH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持 2-8°C的温度。加入一定量的 PBS(PH7.4),用手工或匀浆 器将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右(2000-3000 /)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。 标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上 进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融.

操作步骤

  1. 标准品配制:取51.5ml离心管,分别标注12,3,4, 5。从第一至五管中分别加入标准品稀释液300ul。在第一管中加入标准品溶液300ul,混匀后用加样器吸300ul,移至第二管。如此反复作对倍稀释,从第四管中吸出300ul弃去,第五管为空白对照。(标准曲线浓度: 40201052.50 ng/ml)
  2. 加样: 标准品孔各加不同浓度的标准品50μl,待测样品孔中先加样品稀释液 40μl,然后再加待测样品 10μl(样品最终稀释度为 5 ),将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁, 轻轻晃动混匀。
  3. 加检测抗体:每孔加入检测抗体(HRP100μl,空白孔除外。
  4. 温育:用封板膜封板后置37℃,温育60分钟。
  5. 配液:20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。
  6. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复 5 次,拍干。
  7. 显色:每孔先加入显色剂A 50μl,再加入显色剂B 50μl,混匀,37℃避光显色10分钟.
  8. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)
  9. 测定:450nm波长测量各孔的吸光度(OD),测定应在加终止液后15分钟以内进行。

注意事项:

  1. 试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用,酶标包被板开封后如 未用完,板条应装入密封袋中保存,一个月内有效。
  2. 各步加样均应使用加样器,并经常校对其准确性,以避免试验误差。一次加样时间最好控制在 5 分钟内,如标本数量多,推荐使用排枪加样。
  3. 请每次测定的同时做标准曲线,最好做复孔。如标本中待测物质含量过高(样本 OD 值大于标准品孔第一孔的 OD ),请先用样品稀释液稀释一定倍数(n )后再测定,计算时请最后乘以总稀释倍数(×n×5)
  4. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  5. 底物请避光保存。
  6. 严格按照说明书的操作进行,试验结果判定必须以酶标仪读数为准.
  7. 所有样品,洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。
  8. 本试剂不同批号组分不得混用。

计算:

以标准物的浓度为横坐标,OD 值为纵坐标, 在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的 OD 值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与 OD 值计算出标准曲线的直线回归方程式,将样品的 OD 值代入方程式,计算出样品浓度,再乘以稀释倍数,即为样品的实际浓度。

试剂盒性能:

样品线性回归与预期浓度相关系数 R 值为 0.95 以上,批内变异系数与批间变异系数应分别小于10%10% 。